親和層析中的蛋白洗脫

親和層析是根據(jù)一種生物分子間的特異相互作用來分離物質(zhì)的層析方法，利用待分離物質(zhì)與配體間所具有的特異性親和力來達到分離目的的一類特殊層析技術(shù)。如抗原與抗體、DNA與RNA、酶與底物或抑制物等。

從親和層析填料上洗脫結(jié)合靶標是結(jié)合的可逆過程，需優(yōu)化條件，削弱靶標和配基之間的相互作用。洗脫條件不應(yīng)使靶蛋白變性，除非這些條件與下游程序兼容。

有兩種類型的洗脫方法，即特異性洗脫和非特異性洗脫。

特異性洗脫過程中，介質(zhì)或競爭配基或競爭靶標，通過這種形式攻擊蛋白質(zhì)-配基復(fù)合物，繼而將靶蛋白釋放至溶液中。用于洗脫的競爭介質(zhì)的濃度和量（體積）依賴于其親和力，這種親和力與固定復(fù)合物的親和力相關(guān)。與親和力強的添加物相比，競爭介質(zhì)的結(jié)合越弱越需要更高的濃度和更大的體積。對于弱的競爭介質(zhì)，比配基高10倍是較好的濃度起點。特異性洗脫通常是溫和的，更可能保留蛋白質(zhì)的活性。這種方法的缺點在于：洗脫慢、洗脫峰寬、需要從回收的蛋白質(zhì)中去除競爭介質(zhì)。

對于非特異性洗脫，需根據(jù)配基與蛋白質(zhì)之間的相互作用機制優(yōu)化洗脫條件，如增加鹽濃度、降低離子相互作用或通過改變pH來改變質(zhì)子化/離子化狀態(tài)，從而調(diào)節(jié)氫鍵強度、疏水相互作用及靜電相互作用。從固定的Protein G上洗脫抗體就是一個改變pH的例子，然而Protein G與抗體的親和力非常強，需要不同洗脫條件組合達到zui大程度的抗體釋放。通常，親和作用需要靶蛋白正確地三維折疊，因此離液劑或影響蛋白質(zhì)折疊的試劑可用于洗脫目標蛋白質(zhì)，但是，必須注意保證靶標的正確折疊在洗脫后迅速恢復(fù)天然條件。當親和力弱時，高濃度靶分子結(jié)合后，通過稀釋以解離、洗脫復(fù)合物。

月旭科技可提供的親和層析填料

? Protein G Tanrose 4FF抗體親和介質(zhì)

? Ni Tanrose 6FF（NTA/IDA）/Ni Tanrose 6HP（NTA）/Ni Tanrose 4FF（NTA/IDA）金屬螯合親和介質(zhì)

? Co Tanrose 6FF（NTA）金屬螯合親和介質(zhì)

? IMAC Tanrose 6FF/Chelating Tanrose 6FF金屬螯合親和介質(zhì)

? Benzamidine Tanrose 4FF苯甲脒親和介質(zhì)

? GST Tanrose 4FF谷胱甘肽親和介質(zhì)

? Heparin Tanrose 6FF/Heparin Tanrose 6HP肝素親和介質(zhì)

? Endotoxin rem Tanrose 4FF內(nèi)毒素親和填料

? NHS-activiated Tanrose 4FF/CNBr-activiated Tanrose 4FF預(yù)活化親和填料

月旭科技可提供預(yù)裝柱供您選擇