嘔吐毒素的危害與檢測(cè)

嘔吐毒素(vomitoxin)，又稱脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)，化學(xué)名為3α, 7α, 15一三羥基草鐮孢菌-9-烯-8-酮，屬于單端孢霉烯族化合物，主要由禾谷鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、串珠鐮刀菌、擬枝孢鐮刀菌、粉紅鐮刀菌、雪腐鐮刀菌等鐮刀菌產(chǎn)生。另外，頭孢菌屬、漆班菌屬、木霉屬等的菌株都可產(chǎn)生該毒素。單端孢霉烯族毒素共有150多種，是一類強(qiáng)有力免疫抑制劑，所引起典型癥狀是采食量降低，所以這類毒素又叫飼料拒食毒素。嘔吐毒素是其中最重要一種毒素，主要來(lái)自鐮刀菌屬，尤其是禾谷鐮刀菌和黃色鐮刀菌由于它可以引起豬的嘔吐，故又名嘔吐毒素。

嘔吐毒素被列為3類致癌物。它們具有很高的細(xì)胞毒素及免疫抑制性質(zhì)，因此，對(duì)人類及動(dòng)物的健康構(gòu)成了威脅，特別是對(duì)免疫功能具有明顯的影響。DON廣泛存在于全球，主要污染小麥、大麥、玉米等谷類作物，也污染糧食制品，當(dāng)人攝入了被DON污染的食物后，會(huì)導(dǎo)致厭食、嘔吐、腹瀉、發(fā)燒、站立不穩(wěn)、反應(yīng)遲鈍等急性中毒癥狀，嚴(yán)重時(shí)損害造血系統(tǒng)造成死亡。由于中國(guó)傳統(tǒng)飲食習(xí)慣中糧谷比例大大高于西方，使得嘔吐毒素的危害更為突出。谷物及飼料中DON的含量有嚴(yán)格的*。我國(guó)谷物中DON的*為1.0 mg/kg。

我國(guó)用于檢測(cè)嘔吐毒素的液相色譜法，常常會(huì)利用嘔吐毒素（脫氧雪腐鐮刀菌烯醇）免疫親和柱，免疫親和柱可選擇性吸附樣品液中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇，從而對(duì)脫氧雪腐鐮刀菌烯醇起到非常針對(duì)性的純化作用。

利用抗原抗體反應(yīng)，抗體連接在柱體內(nèi)，樣品經(jīng)過(guò)提取、過(guò)濾后，緩慢的通過(guò)脫氧雪腐鐮刀菌烯酵免疫親和層析柱，在免疫親和柱內(nèi)毒素與抗體結(jié)合，之后洗滌免疫親和柱除去沒(méi)有被結(jié)合的其他無(wú)關(guān)物質(zhì)，再用甲醇洗脫，然后用于檢測(cè)。過(guò)凈化柱后可直接用于液相脫氧雪腐鐮刀菌烯醇含量的檢測(cè)，可提高檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度，達(dá)到快速測(cè)定的目的。

參考標(biāo)準(zhǔn)《GB 5009.111-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的測(cè)定》 ，月旭嘔吐毒素(脫氧雪腐鐮刀菌烯醇) DON免疫親和柱完成符合標(biāo)準(zhǔn)要求。以面粉為樣品，采用月旭嘔吐毒素(脫氧雪腐鐮刀菌烯醇) DON免疫親和柱凈化，然后進(jìn)行檢測(cè)。

回溫：將免疫親和柱從低溫條件下取出后，恢復(fù)至室溫，將柱內(nèi)液體放出；

上樣：待凈化液全部上樣，棄去；

淋洗：5mL磷酸鹽緩沖液，5mL水，棄去，抽干柱子；

洗脫：加入2mL甲醇洗脫，抽干柱子；

濃縮：將洗脫液置于 50℃水浴中氮吹至干，用20%甲醇水定容至1mL，用0.22μm濾膜過(guò)濾，上機(jī)測(cè)定。

色譜柱：月旭Ultimate^® XB-C18 4.6×150mm，5μm；

流動(dòng)相：水：甲醇(80:20)；

流速：1.0mL/min；

柱溫：30℃；

進(jìn)樣量：20μL；

波長(zhǎng)：218nm 。

回收率結(jié)果如下圖：

圖一：面粉樣品空白圖譜